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捷諾特色譜柱一些使用心得分享

更新時間:2018-11-15   點擊次數(shù):2665次
  液相色譜儀是進行定量分析,雜質(zhì)檢查等分析工作中主要的精密儀器,色譜柱是液相色譜儀的zui核心部件。在這里,介紹一下捷諾特色譜柱使用中的注意事項及使用心得。
  一、柱頭類型和不銹鋼毛細管接頭的匹配
  捷諾特色譜柱是消耗品,不是儀器原配的情況很多,如果接頭和柱頭深度匹配將會產(chǎn)生漏液或者死體積過大的現(xiàn)象。接頭比柱頭深度長,不易擰緊而漏液;接頭比柱頭深度短,柱頭內(nèi)留有空隙而產(chǎn)生死體積,使譜帶展寬和峰拖尾。
  二、溶劑的匹配轉(zhuǎn)換
  捷諾特色譜柱內(nèi)保存溶劑和儀器系統(tǒng)內(nèi)存留溶劑,如果和流動相不匹配,使用前需進行轉(zhuǎn)換。特別是流動村j含緩沖鹽時,如保存溶劑足純有機相或有機相比例高,直接將新柱接人使用,會導(dǎo)致緩沖鹽在柱內(nèi)結(jié)晶析出,造成柱頭堵塞。建議儀器和色譜柱經(jīng)常使用,用10%的有機溶劑保持即可。
  三、流動相及待測樣品的過濾
  日常分析工作中,我們使用的流動栩和待測樣品應(yīng)用0.45pm濾膜過濾后再連接或注入到色譜儀上。對于有機相比例高的流動栩可以一起過濾出來備用,但是有機相比例小的流動相一定要現(xiàn)用現(xiàn)濾,分析結(jié)束時一定要先用10%的有機溶劑沖洗管路及色譜柱,為有機相少的流動相容易滋生細菌,造成色譜柱堵寒,影響色譜柱性能。
  四、捷諾特色譜柱分析時應(yīng)進行平衡和老化
  進行的方法是運行幾次完整的分析程序(包括進樣),直到觀察到峰形、保留時間和峰面積穩(wěn)定為止。對某些特定的待測物,如分子量大于1000的,閃擴散速度慢,老化時間相應(yīng)要長,可采取大濃度進樣或在同一個洗脫周期內(nèi)連續(xù)進樣多針的方式加快老化。
  五、pH使用范圍
  一般認為硅膠基質(zhì)柱子的pH使用范足2-8,如果選用的是高品質(zhì)硅膠,加上高密度鍵合和雙封尾,使pH耐受范同zui大提高到lO。注射用頭孢拉定流動村1pH值為8,對色譜柱傷害很大,需要選擇pH值耐受性高的色譜柱。
  六、峰形異常
  峰形對稱性的優(yōu)劣對峰面積和分離度有很大的影響,從而影響分析結(jié)果的準確性。先檢查樣品足否過載,由于樣品過載引起的峰形后拖不能通過改變色譜條件消除。如果發(fā)現(xiàn)過載,需降低進樣量(包括進樣體積或濃度),進樣量越小,峰形越好,例子如頭孢尼西鈉的測定。其次,硅醇基次級保留引起部分峰拖尾。這種情況發(fā)生,選擇高密鍵合和*的雙蜂尾工藝的色譜柱能改善峰形。另外,溶解樣品的溶劑洗脫能力比流動相強會發(fā)生峰前延,所以樣品選用流動相溶解。
  七、捷諾特色譜柱保存
  短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動相(不含緩沖鹽)保存為佳,以盡量減少下次使用的平衡時間。一般只建議在長期保存反相柱的時候用純醇或乙腈,使用80%左右有機相保存也屬好的選擇,且足以避免長菌。強烈建議在柱身上貼標簽標明保存溶劑。離子交換柱和水性凝膠柱等適合保存在水溶液中的色譜柱,可加0.05%化鈉溶液防止K菌。正相柱無論是短期還足長期,都推薦保存住所用流動相巾。
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